1.预柱买多少根合适,色谱柱每天都要用,样品不杂
预柱和保护柱是不一样的。保护柱位置在柱前进样阀后主要是做样是过滤一下样品的污染物。
预柱的位置是在泵后,主要做样是饱和流动相和过滤流动相的做样,现在很少使用预柱。
保护柱的损坏有几个方面一、造成样品峰型变坏,这基本是冲洗不好的。二、造成柱效下降,一般造成下降30%,保护柱就可以报废了。
至于色谱柱的冲洗,根据不同的柱子型号、样品性质等方面去具体的冲洗,情况比较复杂。使用前多看看说明书,可以和色谱柱供应商的技术人员沟通,怎么使用。
冲洗的时候注意是压力,最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间,大家都有个误区就是冲洗时间用分钟或小时计算是不准确,准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。
以上只是大概的过程,具体还有很多的细节,需要一点点的去注意
2.液相色谱柱应该如何使用和维护
卡套柱的安装(加预柱): 1.将卡套架套入柱芯
2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯()
3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片
4.将"子弹头"预柱放入卡套片内
5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧
6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
平衡色谱柱: 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
注意: 在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护: 1. 使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围
3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化
4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存大乙腈中6. 压力升高是需要更换预柱的信号
3.高效液相为什麽加上预柱分离效果没有不加预祝好
问你几个问题啊,
首先,你预柱的填料和色谱柱的填料是一致的吧?不一致就不用继续讨论了。
其次,你的预柱是新的吗?柱芯是新的吗?如果有备用柱芯换一个试试。
其实色谱柱的预柱就相当于在色谱柱前多接了一段色谱柱。如果你的方法是梯度,我建议你稍微调整一下方法,因为这一小段可能影响了整个的实验。
你说分离效果不好了,这个很有可能。因为流动相进入色谱柱的距离加长了,死体积也不同了。
再有,现在的色谱柱做的很成熟。填料里面pH值范围很广,硅羟基含量应该也比较低,装填工艺应该也不错。可是你的预柱,在质量上可能就不是很有保障。
用预柱是好事,可以让强保留物质留在预柱上,避免损伤色谱柱。可是有的时候方法不适合用预柱。索性就撤掉吧。
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